Методики анализа витаминов

Методики анализа витаминов

Витамин А

(Мол. вес 299,22)

Являясь сильно ненасыщенным соединением, витамин А легко реагирует с кислородом воздуха и окисляющими агентами.

Наличие в молекуле спиртовой группы обусловливает реакции с хлорангидридами кислот с образованием производных — бензоат, ацетат и др. в-нафтойнокислый эфир представляет кристаллическое вещество, также обладающее витаминным действием.

Качественные реакции

1. Максимум абсорбции при 328 нм.

2. В хлороформном растворе с треххлористой сурьмой появляется синее окрашивание.

Количественное определение

Реакция с треххлористой сурьмой используется и для количественного определения. Синюю окраску сравнивают со стандартной шкалой так называемых синих единиц.

5—10 г драже экстрагируют хлороформом для извлечения витамина А, хлороформ отгоняют. Остаток омыляют 0,5 н. раствором спиртового раствора едкого кали в продолжение ½ часа. После этого из смеси извлекают неомыляемую фракцию серным эфиром 3—4 порциями (по 50—100 мл), соединенные эфирные вытяжки промывают водой, высушивают безводным сульфатом натрия, растворитель нацело удаляют выпариванием в токе углекислоты, остаток растворяют в хлороформе, чтобы в 1 мл раствора содержалось от 10 до 40 ИЕ витамина А.

К 0,2 мл хлороформного раствора добавляют 1 каплю уксусного ангидрида и 2 мл хлороформного раствора треххлористой сурьмы. Появляющуюся синюю окраску немедленно сравнивают с подходящей по цветности пробиркой стандартной шкалы или в ступенчатом фотометре, фотоколориметре и т. д.

При визуальном способе определения наиболее точные результаты получаются, если окраска по интенсивности укладывается в пределах 4—10-й пробирок.

Для приготовления шкалы пробирок-эталонов 75 г химически чистого сульфата меди и 3,5 г химически чистого нитрата кобальта растворяют в 500 мл воды. Полученный раствор разбавляют водой, как указано ниже.

Реакция витамина А с треххлористой сурьмой протекает быстро, достигая максимума приблизительно через 10 секунд; при низких температурах (0—1°) окраска более устойчива; яркий (дневной или искусственный) свет заметно влияет на быстроту выцветаемости.

Витамин В1 (Тиамин-бромид бромистоводородный)

(Мол. вес 435,2)

1. Качественные реакции. При прибавлении к подкисленному разведенной азотной кислотой 1%-ному раствору нескольких капель раствора нитрата серебра выпадает творожистый осадок, не растворимый в азотной кислоте.

2. Тиохромная проба основана на переводе тиамина красной кровяной солью в щелочной среде в тиохром, растворимый в бутиловом или изоамиловом спирте с синей флуоресценцией:

К 5 мл раствора тиамина (с содержанием 0,01 мг) в делительной воронке добавляют 5 мл 1%-ного раствора красной кровяной соли, перемешивают и оставляют стоять в течение 2 минут. Затем добавляют 20 мл изобутилового спирта и сильно перемешивают, встряхивая в течение 1 минуты, отделяют спиртовый слой и фильтруют. Тиохром, полученный в результате окисления тиамина, обусловливает синюю флуоресценцию.

3. Тиамин дает осадки с некоторыми общими алкалоидными реактивами, например с реактивом Драгендорфа (пикриновая кислота не дает осадка).

Количественное определение

1. После нейтрализации (по бромтимоловому синему) тиамин-бромид определяется аргентометрически.

2. Другой метод основан на свойстве витамина В1 образовывать с диазотированным пара-амино-ацетофеноном соединение фиолетово-красного цвета, которое нерастворимо в воде, со многими органическими растворителями образует цветные растворы, допускающие сравнение с эталонными растворами. Из органических растворителей применяют обычно ксилол или толуол.

Для определения тиамина, растворенного в однородном бесцветном растворителе, нет необходимости извлекать цветное соединение из раствора. В этих случаях прибавляют изопропанол в количестве, достаточном для растворения цветного соединения, и проводят определение по стандартному раствору.

Для анализа берут такое количество препарата, в котором содержится 100 микрограммов (0,0001 г) тиамина. Эталон готовят растворением 50 мг витамина Вх (точная навеска) в 500 мл 50% по объему) этанола, содержащего 1 каплю 4 н. соляной кислоты. Хотя этот эталонный раствор можно сохранять при комнатной температуре в течение нескольких месяцев, предпочитают все же готовить его на срок не более 1 месяца. Кроме эталонного раствора заготовляют: 1) 0,03%-ного раствора пара-амино-ацетофенона в 0,2 н. соляной кислоте; 2) 0,1%-ный раствор нитрита натрия; 3) 1 н. и 2,5 н. растворы едкого натра; 4) 50%-ный этанол (по объему); 5) толуол; 6) изопропанол и 7) 4 н. соляную кислоту.

Для приготовления реактива под названием диазораствор А в небольшой склянке смешивают 10 мл раствора пара-амино-ацетофенона и 2 мл раствора нитрита натрия и охлаждают не менее 2 минут в ледяной воде. Перед пользованием к смеси прибавляют 3 мл 1 н. раствора едкого натра и взбалтывают. Реактив под названием диазораствор Б готовят так же, как и раствор А, с той лишь разницей, что вместо 1 н. раствора едкого натра к раствору Б прибавляют 2,5 н. раствора едкого натра.

Испытуемый ампульный раствор смешивают с таким количеством перегнанной воды, чтобы каждый миллилитр смеси содержал около 100 микрограммов тиамина. В калиброванную пробирку на 10 мл вливают 1 мл смеси, прибавляют 2 мл 50%-ного этанола и помещают в водяную баню при

Внимание, отключите Adblock

Вы посетили наш сайт со включенным блокировщиком рекламы!
Ссылка для скачивания станет доступной сразу после отключения Adblock!

Скачать